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以环状质粒为模板加引物甲乙丙,pcr扩增长度怎么看
1、山西，DNA提取：从环状质粒中提取目标DNA片段，使用适当的提取方法，如碱裂解法或商业DNA提取试剂盒。其次，引物设计：根据目标DNA的序列设计引物。引物分别对应目标DNA片段的起始位置，并且具有适当的引物序列长度和碱基组成。
2、质粒pcr的理论大小的计算方法：模板序列已知，直接将引物序列和模板进行匹配，两条引物之间的DNA片段长度即为质粒pcr产物的理论大小。pcr仪反应后的产物大小，可以泡琼脂糖凝聚电泳，照胶仪下根据Marker的指示条带读取质粒pcr的理论大小。用照胶仪自带的软件直接读出所有质粒pcr的理论大小。
3、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp； 引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近； 引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳。PCR是扩增数目的。
4、还是建议直接去测序，或者如果你有标准品，把标准品和你PCR出来的产物混合在一起跑胶（浓度低一点总共100-200ng就好），胶的浓度高一点，5%或者0%，120伏，多跑一会看会不会有两条带。楼主你可以追问。这样方便点。
到此，以上就是小编对于全质粒测序的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
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